蜘蛛侠和毒液一起出现是在第三部《蜘蛛侠》中，在这部电影中毒液是一个反面人物，他是外太空来的，在一次偶然的机会中他跟着蜘蛛侠回家了，并且使蜘蛛侠成为了自己的宿主，虽然穿上带有毒液的战衣蜘蛛侠变的更厉害了，可是却也像变了一个人一样。
原来的蜘蛛侠脾气性格很好，是个非常温柔并且有正义感的人，可是在成为毒液的宿主之后，蜘蛛侠所有的反面情绪都暴露出来了，他的嫉妒易怒都被毒液放大了数百倍。更可怕的是，蜘蛛侠很享受拥有毒液的力量，他甚至不愿意再变回原来的样子。
但是后来蜘蛛侠还是醒悟了，他虽然知道充满力量的感觉很好，但却不能接受毒液所带来的邪恶影响，所以蜘蛛侠战胜了自己战胜了毒液。在这部电影中毒液是一个大反派，和前段上映的《毒液》电影中的毒液并不是同一个哦。
