高压灭菌锅使用前要水加到水位线；将需灭菌的培养基、蒸馏水或其它器皿放入灭菌锅内，关闭锅盖，检查排气阀、安全阀状态；打开电源，检查参数设置是否正确，然后按下“工作”键，灭菌锅开始工作；自动放冷气，到105摄氏度时，底部排气阀门自动关闭，然后压力开始上升；温度上升至121摄氏度时，灭菌锅再次自动放气，然后开始记时，一般培养基灭菌20分钟，蒸馏水灭菌30分钟；达到规定的灭菌时间后，关闭电源，打开放气阀缓慢放气；当压力指针降至 0时，放气阀无蒸汽排出时，方可开启锅盖。
