D300定位于准专业级新闻机，D90定位于中端机或者高端业余级。虽然二者都采用1230万的同一种CMOS以及Expeed处理器，D300有8000分之1秒的快门，D90最快只有4000分之1秒，D300的快门次数是15万次，D90是10万次。D300不加手柄1秒打六张12位RAW或者JPEG，只要卡够能连续打100张。加上原厂手柄使用5号电池可以1秒连拍8张12位RAW和JPEG，并且也是100张RAW级别。D90则是每秒4、5张连拍速度。并且D300能够以每秒2、5张速度出14位RAW格式照片。D300是机身测光，能够使用尼康老式手动镜头和蔡司ZF镜头测光，机身有测光连动装置。D90不能，只能使用AF和AF-S镜头。D300的对焦系统和D3是一样，D90则沿用之前D200的。1005区和420区的区别明显，51点对焦和11点对焦差别很大。
